Electrophysiologie des Membranes

           Dans le cadre d’une collaboration avec le CEA (Groupe de Transduction du Signal et Osmorégulation (GTSO) du DEVM, Cadarache),

    Nous avons participé au transfert de technologie et à la mise au point au GTSO de la technique de voltage imposé à monoélectrode (dSEVC) adaptée au modèle « cellule de garde ». Le GTSO étant déjà équipé en « patch-clamp », technique qui a permis la majeure partie des caractérisations de canaux ioniques sur des protoplastes de cellules de garde, le laboratoire s’est intéressé au dSEVC, une technique alternative de la technique de voltage imposé à deux électrodes (TEVC), qui présente l’avantage d’enregistrer des courants ioniques de cellules de gardes en place dans l’épiderme. Cette technique est aussi intéressante, pour les cellules techniquement difficiles à utiliser en patch-clamp (ex Commelina communis) et les cellules de petite taille dans lesquelles l’insertion de deux électrodes (en TEVC) est très difficile. Nos expériences en dSEVC ont permis la première caractérisation de courants K⁺ et de courants anioniques (type lent) chez des cellules de garde intactes de C. communis (Forestier et al. 1998). Le même type de courants anioniques ont également pu être mis en évidence, pour la première fois, chez des cellules de garde intacte d’Arabidopsis thaliana et comparés à ceux de Vicia faba (Forestier et al. 1998). Pour ce faire, les canaux K⁺ entrants ont été bloqués (addition de TEA, de Cs⁺ et de Ca²⁺) et, dans ces conditions, l’activité des canaux anioniques de type lent a pu être mise en évidence dans 90 % des cellules de garde testées. La nature des courants a été confirmée par l’application de bloqueurs de canaux anioniques (NPPB, A9C). Chez A. thaliana, seul l’acide anthracène-9 carboxylique (A9C) a permis d’inhiber ces courants anioniques, de provoquer l’ouverture stomatique à l’obscurité et de contrecarrer l’effet de l’ABA 25 µM à la lumière suggérant des caractéristiques pharmacologiques différentes pour les canaux anioniques de type lent chez les cellules de garde de différentes espèces (Forestier et al. 1998).